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利用BIFC研究人源HOXA9蛋白的相互作用

作者:Catherine Lavau & Samir Merabet

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HOX基因编码同源域HD的转录因子TFs,在胚胎发育过程中参与许多过程的控制。HOX蛋白在胚胎发生过程中具有特定的功能。

这种进化发育调节因子家族分为前、中、后旁系同源组PGs,体现了它们沿胚胎前后轴的组织和功能。

我们利用BIFC蛋白技术解剖了人源后HOXA9蛋白与PBX1和MEIS1辅因子的分子相互作用特性。

与前和中HOX蛋白相比,HOXA9具有更为发散的同源域HD,它结合DNA具有更高的亲和力,有一个独特的优先一致的核苷酸序列。

HOXA9同源域HD对于PBX1和MEIS1的三聚体复合物的形成是必要和充分的。

20190509A.jpg20190509B.jpg

如图所示,图A-D是野生型或HX突变型HOXA9在CENT/POST核苷酸探针上用PBX1或PBX1和MEIS1进行的带移实验。

二聚体和三聚体复合物分别用黑色和白色虚线框标识。

底部的数值以相应野生型HOX构建的复合体百分比的方式,表示的是二聚体和三聚体复合物的定量。

红色/蓝色、黑色和灰色箭头表示HOX单体、HOX/PBX1和HOX/PBX1/MEIS1复合物的分别结合。

黑色箭头表示PBX1(p)/MEIS1(m)复合体结合。

图A’-D’从三个独立的实验中定量分析具有HX突变形式的HOXA9结构的三聚体复合物。每个条上的数字对应于平均值。

图E-H显示,捕获到的野生型或HX突变型HOXA9与PBX1在HEK细胞中的BIFC萤光互补,绿色。

HX突变形式的量化显示为相应野生型形式获得的BiFC百分比。

红色荧光标记用于将结果标准化,以提高转染效率。

注意,在内源性MEIS1存在的情况下发生BIFC

图E'-H',是来自三个独立实验的不同hx突变形式HOXA9和PBX1之间的BiFC定量。

与野生型Hoxa9的BIFC相比,其显著性得到了证明,并用t检验进行了评估。

BiFC和EMSAs证明了Hoxa9 HD与pbx1和meis1辅因子为三聚体复合物构成一个可替代的Tale交互界面。


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参考文献

https://www.nature.com/articles/s41598-019-42096-y

文章分类: 行业-蛋白质
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