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利用CRISPR/Cas9蛋白对面包小麦进行基因组编辑

作者:Kangquan Yin, Jin-Long Qiu & Caixia Gao来源:nature

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利用CRISPR/Cas9蛋白体外转录或蛋白基因传递,对面包小麦进行基因组编辑

近年来,CRISPR Cas9‍基因编辑技术已经成为一个强大的工具,用来提高作物品质。

传统的植物基因组编辑主要依赖于农杆菌或质粒轰击携带的质粒携带盒。

这里,我们阐述了一种新的不依赖DNA的方法,通过粒子轰击,利用CRISPR Cas9蛋白体外转录(IVT)或者核糖核蛋白复合物(RNP),对面包小麦DNA进行编辑。

这个协议是我们先前公布的协议的一个扩展。

这种方法消除了CRISPR cas9蛋白整合到基因组DNA的随机性,而且减少脱靶效应。

该协议扩展的文章中,我们阐述了准备IVT和 RNP的的协议;经过PCR /限制性内切酶(RE)和新一代测序验证;通过基因枪交付;

利用混合方法和Sanger测序,进行突变回复和突变体的鉴定。使用这些协议,研究人员应具备分子生物学和基因枪转化的基本技能和经验。

通过使用这些协议,可以在9 - 11周内生成和鉴定不使用任何外来DNA的植物。

利用CRISPR Cas9 IVT- 或 RNP进行小麦基因编辑流程


利用CRISPR Cas9 IVT- 或 RNP进行小麦基因编辑流程


利用CRISPR/Cas9蛋白对面包小麦进行基因组编辑PCR策略

被轰击的未成熟胚芽的下一代测序所采用的PCR策略图。


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预期结果


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参考文献

Genome editing of bread wheat using biolistic delivery of CRISPR/Cas9 in vitro transcripts or ribonucleoproteins

Zhen Liang, Kunling Chen, Yi Zhang, Jinxing Liu, Kangquan Yin, Jin-Long Qiu & Caixia Gao


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