恒温扩增/等温扩增技术
Magigen RDA恒温扩增技术
什么是RDA恒温扩增？
RDA, Recombinase Depend Amplification, 是以重组酶介导的快速等温扩增技术。
目前市场上的等温扩增技术主要有RDA、LAMP、RPA，主要用于POCT等即时快检产品开发。
【产品名称】RDA-exo 核酸扩增试剂盒（液体型）
【产品编号】B006M
【包装规格】48 T
【RDA价格】1950元
【产品内容】
| 产品组成 | 数量 |
| AR Buffer | 1 管 |
| B Buffer | 1 管 |
| RDA-exo 酶反应液 | 1 管 |
| 阳性对照引物探针 | 1 管 |
| 阳性对照 DNA 模板 | 1 管 |
| 使用说明书 | 1 份 |
【RDA用途】本产品可用于 DNA 的实时荧光检测。RDA Exo试剂是核酸等温扩增荧光型预混液，适用于DNA样本。终点检测：荧光检测。
【RDA恒温扩增技术原理】RDA（Recombinase-dependent amplification），即重组酶依赖扩增技术，在恒定温度下快速实现对靶标的扩增，并利用特殊设计的特异性荧光标记探针，可在仪器上实时观测扩增反应过程，5-30 min 完成反应。
【RDA恒温扩增优势】
RDA Exo试剂套件包含了多种酶组份，exo荧光探针，可以对目标DNA模板进行快速等温扩增，荧光检测，速度快，时间可以快至10分钟以内，灵敏度高，经过良好设计，可以检测到低至10个拷贝以内。利用RDA Exo产品，客户可以开发出合适的、低成本的快速检测产品。
产品优势：
a. 5-15分钟内获得检测结果，实现真正意义『快检』；
b. 30℃-42℃常温恒温反应，无需热循环过程，无需另购其他昂贵设备；
c. 灵敏度高，可实现单分子检测灵敏度 ；
d. 采用液体形式试剂。
【储存条件及有效期】本产品于-20℃避光密封保存，有效期 12 个月。
【适用仪器】MA1610 等温荧光仪、AGS8800 恒温扩增荧光检测仪等，以及SLAN 系列荧光定量 PCR 仪、MA6000 实时荧光定量 PCR 仪等。使用其他荧光检测设备时，请留意耗材适配性。
【RDA恒温扩增步骤】
1 DNA 提取：请参考商品化试剂盒的方法提取核酸 DNA，推荐使用离心柱或磁珠法。
2 检测方法：
2.1 取出试剂盒组分，融化后混匀，备用；RDA-exo 酶反应液置于冰上备用。
2.2 按下表在离心管中制备反应混合物，混匀，瞬离后分装。
| 成分名称 | 单个反应加入量（μL） |
| ddH2O | 13.5 |
| AR Buffer | 20 |
| 引物 F (10 μM) | 2 |
| 引物 R (10 μM) | 2 |
| 探针 (2 μM) | 2 |
| RDA-exo 酶反应液 | 6 |
| 总体积 | 45.5 |
2.3 在八连管盖上加入 2.5 μL B Buffer，在反应液中加入 2 μLDNA 模板或 ddH2O。离心后混匀，瞬离，尽量避免气泡，立即上机。
注意：加入 B buffer 后，RDA-exo 反应会立即开始。
2.4 按仪器操作说明设置相关参数。反应体系为 50 μL，荧光通道为 FAM，反应温度 39℃，每 1 min 收集荧光信号，时间 30 min。在观测窗口可观察到荧光的实时变化。
注意：使用实时荧光定量 PCR 仪时，注意检测耗材的适配性。
试剂盒阳性对照反应
按下表制备反应混合物，以阳性对照品为模板，其余操作同上。
| 成分名称 | 单反应加入量（μL） |
| ddH2O | 13.5 |
| AR Buffer | 20 |
| 阳性对照引物探针 | 6 |
| RDA-exo 酶反应液 | 6 |
| 总体积 | 45.5 |
3 结果分析
以雅睿MA1610恒温荧光仪为例。其他荧光定量PCR仪参照具体荧光定量PCR仪使用说明书进行基线设定和阈值设定。（注：不同荧光定量PCR仪的判定标准有差异，可依据实际情况进行调整）。
3.1 阈值时间（Time Threshold，TT值）：荧光值到达阈值的时间。
3.2 阈值设置：使用仪器默认的阈值。或设置为刚好超过阴性对照曲线（无规则的噪音线）的最高点。
3.3 基线设置：如果待检样本中最小TT值>18，基线的起始点默认3-15，如果待检样本中最小TT值<18，基线的终止值改为[最小的TT值-4]，再分析结果。
3.4 结果判断：
（1）试剂盒空白对照的曲线，与横坐标轴接近平行。
（2）试剂盒阳性对照的曲线，为S型扩增曲线。
（3）用户自定义反应体系中空白对照的曲线，应与横坐标轴接近平行。
（4）用户自定义反应体系中，反应效率较高，曲线呈S型；反应效率较低，曲线斜率较低。
【RDA恒温扩增注意事项】
1. 本产品仅供科研使用，使用前请仔细阅读本说明书。
2. 冰上配制反应体系，将有利于实验重复性。应尽快完成操作和检测，以免检测效率受到影响。
3. 在同一核酸提取方法下，不同样品类型，所提取的核酸含量和纯度会有差异，导致扩增效率不同。
4. 如果试剂保存、配制或运输不当，导致试剂检测性能下降，则会出现假阴性的结果。
5. 如果出现实验室环境、试剂、仪器污染，或样本间交叉污染的情况，则会影响检测结果准确性，出现假阳性结果。
6. 请严格按照基因扩增实验室的管理规范进行实验操作。
7. 实验结束后，检测过程中所产生的废弃物应按照相关规范进行处理。
购买注意事项：
1. RDA核酸恒温扩增预混液价格
RDA核酸恒温扩增预混液的价格会随外汇汇率的波动而变化，请以实际价格为准。
2. RDA核酸恒温预混液运输
RDA核酸恒温试扩增剂盒价格是产品含税价格。没有包含运费等其他费用。有些产品需要采用干冰运输方式，请在购买前咨询运费、是否支持干冰运输等事宜。
3. RDA核酸恒温试扩增剂盒图片仅供参考，请以实际为准。
咨询热线：18027152056
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