PCR试剂盒/PCR原料/分子RT酶IVD原料
RT-PCR逆转录酶/MMLV反转录酶
【产品名称】Magigen Magicscript 耐热逆转录酶 II
【产品编号】A001S
【包装规格】20,000U
【产品内容】
| 组份 | 体积 |
| 5× Reaction Buffer 1 | 1 ml×1 支 |
| 耐热逆转录酶 II（200 U/µl） | 100 µl×1 支 |
| 100 mM DTT | 250 µl×1 支 |
| ddH2O | 1.5 ml×1 支 |
【美格RT酶的优点和特性】
本产品为基因重组技术克隆表达的莫洛尼鼠白血病病毒(Moloney Murine Leukemia Virus) 逆转录酶 (MMLV Reverse Transcriptase)。Magigen Magicscript 耐热逆转录酶 II 在降低了 RNase H 活性的基础上，同时进行了特异性的改造，增加了该产品对温度的适应区间（更高的热稳定性和更长的半衰期）。
【逆转录酶活性定义】
以 Poly (rA)为模板，Oligo (dT)为引物，在 37℃条件下，10分钟内催化 1 nmol dTTP 掺入所需酶量定义为 1 Unit。
【逆转录酶储存条件及有效期】
-20℃密封保存，有效期 12 个月。
【美格RT-PCR逆转录酶使用方法】
使用示例（First Strand cDNA 合成）：
| 反应体系 | 体积（μl） |
| 耐热逆转录酶 II | 1 |
| 5× Reaction Buffer 1 | 4 |
| 100 mM DTT(建议终浓度为 10 mM) | 2 |
| RNase inhibitor（20-40 U/µl） | 1 |
| dNTP 混合物(各 25 mM) | 1 |
| 引物 | 10μM-250μM |
| 模板 | 1 pg-100ng |
| 补充 ddH2O至终体积 | 20-25 |
RT-PCR反应步骤：
1. 轻柔混匀反应体系；
2. 建议反应程序：
| 温度 | 时间 |
| 25℃1 | 2min |
| 45℃ | 30min |
| 85℃ | 2min |
注 1：仅在使用 Random hexmers 时需要此步骤；
应用：所得的 cDNA 可直接用于 2nd-Strand cDNA 合成或者 PCR扩增。
热失活：80℃ ，20 min。
酶储存液：150 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl (pH7.6), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1% NP-40，50% Glycerol。
注意：
1. Magicscript 耐热逆转录酶 II 最适温度区域为 37-45℃，超过45℃（低于 65℃），随着温度升高，残留活性会相应下降，但依然能保持至少 70%的活性；其 RNaseH 活性为野生型 MLV 的三分之一；
2. 如需使用本产品进行一步法 RT-PCR实验，建议在研究人员已有的完整 PCR体系（已包含模板和特异引物等组分）中补充如下组分：
| 反应体系 | 体积（μl） |
| 耐热逆转录酶 II | 1 |
| RNase inhibitor（20-40 U/µl） | 1 |
| 终体积 | 20-25 |
建议RT-PCR反应程序：
研究人员在反转录复杂模板时可以提高反应温度以获得较佳的实验结果，同时可以根据实验设计自行优化各项参数或使用研究人员自行摸索的反应体系
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