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美格生物
MAGIGEN
T7核酸内切酶 / T7 Endonuclease


如何识别DNA的特异序列?Magigen T7核酸内切酶是您的好助手!


【 产品编号】C007S

【 产品名称】Magigen MagicScript T7内切酶 / T7核酸内切酶 / T7 Endonuclease I 蛋白

【 预期用途 】本产品用于基于基因编辑技术平台的相关研究

【 包装规格】250U

【 产品内容 】

产品组成C007S
10×T7 Endonuclease I Reaction Buffer0.5 ml×1 支
Magigen T7 Endonuclease I 蛋白(10U/µl)25 µl


【 产品概述 】

T7核酸内切酶 / T7 Endonuclease I 识别并切割不完全配对 DNA、十字型结构 DNA、Holiday 结构或 DNA分叉点、异源性 DNA;同时能以缓慢的速度切割带有切刻缺口的双链 DNA。该酶切割错配位点 5’端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。本产品可用于基因突变、SNP、TALEN 或CRISPR/Cas9 形成的突变体检测,识别错配 DNA,分解四方向交叉 DNA 或分支 DNA;检测异源性二聚体或切刻 DNA;用于随机切割线性 DNA 进行 Shot-gun 克隆等。

【 活性定义 】

在 50 µl 反应体系,37℃条件下,1 小时将 90%以上的 1µg 超螺旋十字型结构的 pUC(AT)* 转化成 90%以上的线性结构所需要的酶量定义为一个活性单位。

【储存条件及有效期】

本产品于-20℃密封保存,有效期 12 个月。

【 使用方法 】

1. PCR 扩增带有错配位点的 DNA 片段

   1.1 PCR 反应使用以下两个模板进行:

        来自靶向细胞的 gDNA(如 Cas9 或 TALEN 转染细胞);

        来自阴性对照细胞的 gDNA(例如非特异性 DNA 转染细胞);

        以 100 ng 转染后的细胞基因组 DNA 为模板,建议扩增片段长度为 1kb 左右。设计引物时, 使突变位点不要在片段中间。

   1.2 使用商业试剂盒或其他方法纯化 PCR 产物,同时准确定量。 *1

2. T7核酸内切酶 I 酶切反应

   2.1 根据下表配置反应体系:

       

PCR Products200 ng
10×reaction buffer2 µL
Nuclease-free WaterTo 19 µL


    2.2 根据下述条件对 PCR 产物进行退火:

初始变性95°C5min
退火95-85°C-2°C/s
85-25°C-0.1°C/s

4℃


    2.3 在退火产物中加入 1µl T7 Endonuclease I,37℃孵育 15min。

    2.4 将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。 *2

         1. 如无需计算突变率,仅进行突变检测,PCR 产物可直接进行退火,如果未进行纯化或提取,建议直接加入酶切反应中的

             PCR 产物体积不超过 5µL;

         2. 反应结束后如需长期保存产物,需加入终浓度 20mM EDTA 终止反应,室温存放 30min 后,会开始出现非特异切割现象。

备注:

T7 Endonuclease I 是一种底物结构选择性的酶,该酶针对不同的 DNA 底物展现出不同的切割活性。因此,切割特定底物时,必须摸索并控制好酶的用量和反应时间:

反应温度超过 42℃,反应时间超过 30min,酶量使用过大均会出现非特异核酸酶的活性;

反应温度超过 55℃,酶活显著下降。


Magigen Magicscript T7核酸内切酶 / T7 Endonuclease购买指南

1. T7核酸内切酶 / T7 Endonuclease价格

   T7核酸内切酶的价格会随外汇汇率的波动而变化,请以实际价格为准。

2. T7核酸内切酶 / T7 Endonuclease运输

   T7核酸内切酶价格是产品含税价格。没有包含运费等其他费用。有些产品需要采用干冰运 输方式,请在购买前咨询运费、是否支持干冰运输等事宜。

3. T7核酸内切酶图片仅供参考,请以实际为准。

咨询热线:18027152056


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