精准肿瘤学SaCas9完全性基因敲除Cpf1完全性基因敲除    SpCas9完全性敲除      传统条件性敲除            传统完全性敲除            基因敲除小鼠传统同源重组基因敲入SaCas9基因敲入         SpCas9基因敲入        Cpf1基因敲入            基因敲入小鼠ES囊胚注射嵌合体小鼠细胞产品        转基因小鼠    定点突变        CAR-T细胞    人源蛋白质PCA筛选      验证人源蛋白质相互作用人源蛋白质PCA检测人源蛋白质两两之间相互作用的PCA检测验证人源蛋白质共定位  全基因组甲基化测序分析动植物基因组重测序      人类全基因组重测序      外显子测序                    人类基因组测序    16S/18S/ITS扩增子测序细菌基因组测序          真菌基因组测序          小基因组测序              宏基因组测序              微生物基因组测序转录组测序分析    Small RNA测序    IncRNA测序        RNA测序分析      基因芯片              小鼠胚胎及相关产品      小鼠基因型鉴定            打靶载体构建                胚胎冻存                       8细胞胚胎注射          原核/胞质注射          常规囊胚注射             显微注射                        质粒选购载体自建

咨询热线

020-80925240   34438810  18027152056

美格生物

MAGIGEN

BiFC与蛋白质相互作用

蛋白质相互作用高通量筛选和检测服务BiFC

BiFC,bimolecular fluorescence complementation,双分子荧光互补技术,是一种快捷、直观地判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术。

BIFC巧妙地将荧光蛋白分子的两个互补片段分别与目标蛋白进行融合表达,如果荧光蛋白活性恢复则表明两个目标蛋白发生了相互作用。

广州美格生物在蛋白质研究领域拥有国际一流的研究团队,拥有独立的BIFC专利和丰硕的研究成果。

应用领域:

√ 高通量筛选蛋白质相互作用

√ 检测蛋白质相互作用及其亚细胞定位

√ 筛选和鉴别酶-底物复合物

√ 筛选相互作用配偶体

√ 翻译后修饰的蛋白质组学研究

√ 筛选和检测SUMO与蛋白底物的共价及非共价结合

√ 筛选病原蛋白和宿主蛋白相互作用

√ 信号传导的级联机制和细胞信号调控网络


技术原理

白质在细胞中往往不是独立完成其功能,而是通常与其他蛋白质相互作用形复物,从而在特定的时间和空间内完成特定的功能。了解蛋白质间的相互作用,特别是大规模高通量地筛选蛋白质间的相互作用,进而描绘出蛋白间相互作用的网络图谱,对揭示一个蛋白质的功能和最终阐明细胞中各种生命活动的分子机制有无可取代的重要意义。

 蛋白质片段互补技术(proteincomplementation assay, PCA) 是一种直观、快速地分析在活细胞中蛋白质之间相互作用及定位的新技术。该方法的机理如下: 结构完整的蛋白质才能实现其功能。然而,当将功能蛋白分割分成了 N C端两半时,任何一半均不能单独发挥作用,但若在空间上距离足够近就可以互补恢复原有功能。将NC端两个不具有活性的片段分别与目标蛋白连接,如果两个目标蛋白有相互作用,就使得被分割的功能蛋白的两个片段在空间上相互靠近并重新形成有功能活性的蛋白,通过检测活性即可判断目标蛋白是否发生相互作用。本公司根据不同实验的需要,用于PCA的功能蛋白有荧光素酶和荧光蛋白等。


特点与优势


本公司的PCA文库包括了近两万个人类蛋白,可以高速便捷地筛选人类细胞中的蛋白互作,也可以筛选病原蛋白与人类宿主蛋白之间的互作。本公司以蛋白质片段互补技术为基础高通量筛选蛋白质间相互作用,有如下特点和优点:

1、在活细胞中直接、原位检测蛋白质间相互作用。

2、灵敏度高,足以检测与内源性表达水平相当的蛋白质间相互作用。

3、能检测到短暂的,间接的蛋白质间相互作用。

4、自主研发的生物信息学软件,方便快捷地分析结果和绘制蛋白相互作用网络图谱。

技术步骤

1. 将待测基因克隆入含功能蛋白N端的表达载体构建诱饵质粒;

2. 将诱饵质粒转化细胞,选择被转化的细胞

3. 再将文库质粒(含18000个人类基因,已克隆入含功能蛋白C端的表达载体)转化到表达诱饵质粒的细胞中;

4. 通过流式细胞仪或荧光素酶报告系统高通量筛选和鉴定与诱饵相互作用的蛋白。

5. 生物信息学分析结果,给出与诱饵蛋白相互作用的蛋白列表。

6.提交实验报告(包括实验操作流程,数据、图表),提交与诱饵蛋白相互作用的蛋白列表。

7.(可选)通过两两之间相互作用的PCA细胞免疫荧光或免疫共沉淀进一步验证与诱饵相互作用的蛋白。


在显微镜下观测蛋白    无相互作用       有相互作用

对在细胞内的相互作用   在流式细胞仪检测蛋白对的相互作用

技术应用实例

Pilot screen for AKT1-interactionpartners

Ding Z et al. PNAS2006;103:15014-15019

Pilotscreen for AKT1-interaction partners. (A) AKT1 interaction with PDK1demonstrated by PCA. IFPN-AKT1 HeLa Tet-on cells stably transfected tocoexpress PDK1-IFPC yielded highly fluorescent cells with enhanced fluorescenceat the cell membrane and points of cell–cell contact. Inhibition of PI3K withLY294002 (20 μM) for 3 hr abrogated membrane localization. (B) Selected RePCAclones with different fluorescent patterns. Expanded clones were assessed forfluorescence after doxycycline induction. The target genes activated in eachclone are shown under each image. (C) SSB clone showing nuclear fluorescence.(D) SLC3A2 clone showing membrane fluorescence

Screen human Ras-interactingproteins in live mammalian cells using PCA

Zheng ZY, et al. Oncogene 201231(43):4630-4638

CHMP6and VPS4A are novel H-Ras binding proteins. (a) HT1080 cells expressingYn-H-Ras(12V) and either Yc-tagged CHMP6 or VPS4A, together with CFP-taggedGalT, Rab5A, Rab7A, or Rab11A, which mark Golgi, early (E.) endosomes, late(L.) endosomes/MVBs, or recycling (R.) endosomes, respectively, were analyzedby confocal microscopy. CFP and the reconstituted YFP signals werepseudo-colored red and green. Dotted lines mark the cell boundaries. Insets arescaled up images to better show co-localization between the CFP and YFPsignals.


返回首页


探索与发现
文章附图

HOX基因编码同源域HD的转录因子TFs,在胚胎发育过程中参与许多过程的控制。HOX蛋白在胚胎发生过程中具有特定的...

文章附图

拷贝数变异(CNV)是遗传变异和进化潜力的普遍来源,但在进化种群中CNV的动态和多样性仍不清楚。恒化器中的长期进化...

文章附图

蛋白质-蛋白质相互作用PPI是基因表达、蛋白质易位、细胞周期进程和信号转导等最基本的细胞机制的核心。细胞蛋白质组通...

文章附图

炎症性肠病(IBD)是一种以肠黏膜的炎症为特征的疾病。虽然IBD发生的确切机制尚不清楚,但其发病机制与多种因素有关...

文章附图

内质网膜和线粒体外膜之间的紧密接触促进细胞器之间脂质的有效转移,并协调Ca2+信号转导和应激反应。这种耦合的变化与...

文章附图

在生理和病理条件下,蛋白质多聚是与神经退行性变有关的蛋白质的一个内在特征。Mendelian形式的神经退行性疾病中...

文章附图

尽管经过几十年的监测和药物和非药物干预,季节性流感病毒每年仍在全世界引起流行病。这些反复发生的流行病的关键过程是病...

文章附图

颗粒酶B激活细菌中多条细胞死亡程序。颗粒酶B将生物合成和代谢途径中的酶解开。大肠杆菌,李斯特菌和分枝杆菌靶向分享2...

文章附图

Khalil教授团队最近开发了一个基因工具平台,用于分析蛋白质聚集,并在2017年10月的《Cell》杂志发表。我...

文章附图

了解干眼症的病理生理学(DED),必须要表征在眼球表面的液体蛋白,包括泪液(tear fluid,TF)和泪腺液(...

文章附图

在X连锁肾上腺脑白质营养不良中,ABCD1中的突变导致的ALD蛋白功能丧失。肾上腺脑白质营养不良的特点是脱髓鞘和神...

文章附图

重复的细胞分裂和老化的影响干细胞的功能。然而,其发生机制尚不完全清楚。在这里,我们表明,端粒保护蛋白1A(Pot1...

文章附图

融合基因的研究主要集中在产生杂交蛋白质的融合,或者说是启动开关事件,使基因处于异常信号的控制之下。然而,基因融合使...

文章附图

最近美国西北大学的研究揭示了新的出生缺陷和流产的主要原因之谜,为尚未被充分研究、但至关重要的遗传学领域的进一步研究...

文章附图

转录因子Nrf2是一种细胞抗氧化反应的主要调节因子,在非小细胞肺癌(NSCLCs)中,经常被基因激活,例如,在负调...

文章附图

    2017年9月5日,中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所丁建平研究组在《Cell》子刊...

技术与服务
会员登录
登录
我的资料
我的收藏
购物车
0
留言
回到顶部