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美格生物Magigen

领先的POCT、IVD分子检测技术提供商
科研用快速扩增产品
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RDA - exo 48R等温扩增荧光型 -冻干
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RT-RDA -Basic 48R等温扩增基础型-冻干
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RDA快速等温扩增技术

RDA, Recombinase Depend Amplification,   是以重组酶介导的快速等温扩增技术。

RDA 反应所需要的关键酶是能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶(KX)、DNA 单链结合蛋白(SSB)和链置换DNA 聚合酶(Bsu)。 RDA反应具体过程为:

a.   首先,针对目标DNA片段设计一对正向和反向引物,重组酶KX与引物结合形成复合物,该复合物在双链DNA 模板中寻找靶位点;

b.   一旦找到靶位点,复合物在模板上定位后可直接引发链交换反应形成D 状环,SSB 随即结合被置换的DNA单链,形成D-Loop 结构;

c.   重组酶-引物复合物主动水解体系中的ATP 导致复合物构象改变而解离,重组酶解离后引物3'端暴露并被Bsu识别,Bsu按照模板序列在引物3'端添加相应碱基,DNA扩增反应启动;

d. Bsu在延伸引物的同时,继续解开模板的双螺旋DNA结构,DNA 合成过程继续进行;

e. 正反向两条引物扩增完成即形成一个完整的扩增子。在合成过程中,母板双链始终是分开的,正向和反向引物让链的合成从两个方向同时进行。该循环反复扩增进行,并最终导致要扩增的双链DNA的指数增加。

跟其他等温核酸扩增技术以及PCR技术相比,RDA技术主要表出以下5个优势:

(1)RDA 技术拥有快速的反应效率,样本与试剂一接触便开始反应,不需要进行DNA 双链的变性裂解,在20 min 内得到检测结果;

(2)RDA 反应在恒温下即可进行(37~42℃),不需要热循环仪进行核酸扩增,所需设备简单、经济;

(3)RDA 技术可检测RNA、miRNA、ssDNA 以及dsDNA 样本,检测范围较广泛

(4)RDA 检测试剂盒操作简单,不需要复杂的技术培训;

(5)RDA检测形式多样,可开发成为便携式核酸检测体系,用于现场快速检测。

利用RDA可以开发出低成本、高效、精准的POCT分子检测。RDA快速等温扩增技术有着巨大的发展前景。

在检测新冠状病毒COVID-19病毒的实验中,RDA检测到病毒的时间可以缩短到10分钟以内,灵敏度可以检测到少于10个拷贝的病毒,灵敏度达到临床的要求。


RDA4-500x600.jpg

RDAPCRLAMP三种DNA片段体外扩增技术比较

检测方法

RDA技术

PCA技术

LAMP技术

酶组分

重组酶、聚合酶

常规Taq

聚合酶

最适反应温度

37-40

95-55-72

60-65℃恒温

反应时间

最快可低至10分钟左右

1.5-2小时

40分钟左右

引物数

1

1

2-3

试剂状态

冻干粉

液体

液体

检测方式

电泳、探针法、荧光定量侧流试纸

电泳、探针、胶体金法检测

电泳检测、比浊检测

检测设备

无需任何仪器或简单便携设备

PCR扩增仪、荧光定量PCR扩增仪

水浴锅或恒温箱

检测材料价格

价格相对较高

价格便宜

价格相对较高

气溶胶污染

常温扩增,几乎没有污染,可真正意义上脱离PCR实验室

需要专业的PCR实验室和专业的操作,否则污染机率极高

高温扩增,也需要PCR实验室保证没有交叉污染

灵敏度

灵敏度高,特异性强

灵敏度高,特异性强

气溶胶,假阳/阴性多

操作

极为简单,无需专门学习,对设备操作要求低,可实现真正意义上的便捷

需要专业度极高的操作要求,需要专门培训设备操作

要求专业

适用样品:

病毒、细菌、转基因、寄生虫等

通用

病毒、细菌、转基因、寄生虫等



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快速检测技术应用
2020-08-27
2020-04-18
2020-01-21